ArchaeBone: Återskapa ben artefakter med vävnadsteknik (1 / 8 steg)
Steg 1: Odling av celler
-Innan vi börjar något, handskar och STERILISERA.
-Sterilisering är kritiskt viktigt i tissue engineering processen. Föroreningar från kemikalier eller bakterier kan förstöra veckors arbete och slösa bort alla pengar i projektet. Etanol är din nya bästa vän; folk kanske tror att du har blivit alkoholist när de luktar din nya vän på dig hela tiden, men det är bästa någonsin. Också bli inte alltför berörs när du spiller det ganska mycket hela labbet; det avdunstar super snabbt.
-När steril öppnar du har varit lagra din osteoblaster i inkubatorn.
-Vi vill nu kontrollera för sammanflödet. Confluence talas vävnad för cell befolkningstäthet.
-Du vill ha > 85% (ungefär) sammanflödet innan passaging celler. Vilket innebär att 85% av fältet visning du ser genom dina Mikroskop har celler. Detta är viktigt att bo på eftersom konfluenta celler i inte fortsättningen reproducera. Det är också bra att växa så många celler som möjligt eftersom de är en värdefull resurs som du kan behöva.
-Om inte konfluenta, du måste ge dina celler mer tid för att växa. Så sterilisera kolven, föra den till biohood/ren bänk och aspirera media ur det samtidigt vara medvetna om inte skrapa botten av kolven där cellerna lever. Kasta din pipett. Med en ny pipett, Fyll bara botten av kolven med nya medier.
-Om konfluenta, kommer att du behöva passage dina celler.
- Sterilisera kolven och föra den till biohood.
- Aspirera media utan att skrapa botten av kolven. Kassera pipett.
- Tvätta cellerna i PBS genom pipettering i kolven tillräckligt PBS för att täcka botten. Försiktigt luta kolven fram och tillbaka.
- Aspirera PBS och kassera pipett.
- Pipettera tillräckligt trypsin i kolven så att täcka botten. Luta den fram och tillbaka.
- Sterilisera kolven och inkubera i 2 min.
- Aspirera på celler och trypsin och infoga dem i ett centrifugrör.
- Centrifugera under 5 minuter vid 1300 rpm (granska centrifugering teknik och glöm inte motvikten.)
- Aspirera trypsin samtidigt vara medvetna om inte tar cellpelleten. Kassera pipett.
- Infoga en känd volym av media i röret.
- Aspirera media och pellets att avbryta cellerna.
- Utföra en celltal för att förstå din celldensitet per volym media.
- Distribuera dina suspenderade celler in i nya kolvar.
- Täcka botten av kolvar med media. Markera kolven med datum och ditt namn. Sterilisera och inkubera.
Bifogat är cell kultur handboken vi använde i klassen. Det är mycket grundlig och en fantastisk resurs.