Hur man mäter fluorescens från om Stianing (3 / 4 steg)
Steg 3: Cellecting Raw-Data
Om du målat för flera färger, vilket är vad jag gjorde, måste vi skilja dem för att analysera en i taget. Jag stianed med DAPI, en nukleär fläck att identifiera enskilda celler (blå), och för B1-integriner (röd). Jag vill bara mäta B1-integrin uttryck så för att separerade färgerna jag följt dessa steg:
"Bild" -> "Färg" -> "Split kanaler"
Detta gav mig tre kanaler (nu alla visar i grå bilder), en röd, blå och grön kanal. Den röda kanalen hade min integrin fläcken, blå hade DAPI fläcken och gröna var emtpy eftersom jag inte fläcken för något grönt tunnar tid. Jag behövde bara röda, så jag stängde de andra två fönster.
Nu zoomade jag in på min cell genom att flytta min markören över cellen och klicka på uppåtpilen på tangentbordet. Då jag valt verktyget "frihand val" (den njurformade knappen) och beskrev min cell som visas. För att ta mått, bara klicka på "m" på tangentbordet. Detta öppnar ett fönster med våra önskade mätningar som vi valde tidigare på dem.
Nu måste vi ta mått för vår bakgrund. Så Välj verktyget "rektangulär" och välja en del av bakgrunden, se till att bara gå över tomt utrymme och inte andra celler. Klicka sedan på "m" igen. Gör detta tre gånger totalt så har vi tre bakgrundsmätningarna i genomsnitt från.