Låt cellerna uppvisar starkt grönt ljus--jordbaserad god Jordbrukarsed Transfection

jag sökte instructable hemsida. Det finns ingen instructable talar om transfection, så jag bestämde mig att skapa en om detta ämne. I detta instructable, jag kommer att visa dig hur man levererar grönt fluorescerande protein (GFP) i polariserade MDCK-G celler att göra cellerna ställer ut ljust grön fluorescens i UV-belysning med en elektroporation system som kallas iPorator.

GOD JORDBRUKARSED:
Grönt fluorescerande protein (GFP) är ett protein som uppvisar ljusa grön fluorescens när de utsätts för blå för ultraviolett ljus. God Jordbrukarsed var först isolerade från maneter Aequorea Victoria av japanska vetenskapsmannen Osamu Shimomura (han vann Nobelpriset i kemi 2008 för upptäckt och utveckling av god Jordbrukarsed) 1961. God Jordbrukarsed hade använts i märkning organismerna i identifieringssyfte. När den god Jordbrukarsed levereras i cellen, kommer cellen fluorescerar under fluorescens mikroskopi. I detta instructable jag kommer att använda gWiz god Jordbrukarsed.

Transfection:
Transfection är processen att sätta nukleinsyror i celler för att blockera eller uttrycka vissa funktioner i cellen. Transfection kan delas in i kemiskt baserade transfection (Lipofectamine 2000 av Life-teknik är den vanligaste), icke-kemiska transfection (elektroporation är det vanligaste sättet), och partikel-baserade transfection som magnetofection. Det är mycket svårt att transfect helt polariserade eller fullt differentierade celler med hjälp av kemisk metod. Kemisk-baserat trasnfection och partikel-baserade transfection kommer att införa extra saker (som lipid, polymerer och magnetiska nanopartiklar) förutom de ville nukleinsyror i cellerna under transfection och de extra foder kan skapa oönskade eller oväntade resultat efter transfection. Cellmembranet öppnar massor av små hål under elektroden kraft i electrodeporation, och nucleic syror kan komma in i cellen via dessa hål. Traditionella elektroporation gäller en mycket hög spänning (hundra till tusen volt) i cellsuspension. Det dödar massor av celler och vidhäftande celler egenskaperna är olika i cellsuspension och cell skiktet. För angränsande celler ger på plats transfection det bästa resultatet eftersom cellerna i fysiologiskt relevanta postmeitotic stat. I detta differentierade instructable jag kommer transfect fullt MDCK-G (Madin-Darby Canine Kidney celler) celler på plats med hjälp av elektroporation systemet kallas iPorator av primax biovetenskaper. Denna maskin använder en liten ström i stället för en hög spänning under transfection för att minska cellskador. Under transfection växer celler på porösa membran skäret (ingen resuspension krävs). Detta system är bäst för angränsande celler. Detta system fungerar dock inte för upphängning celler.