En Arduino-powered microplate spektrofotometer (15 / 16 steg)
Steg 15: Kör maskinen
För att testa maskinen, mätt vi en seriell utspädning av 2,3 diaminophenazine. Den här produkten av en vanligt förekommande reaktion i en typ av bioassayen alarmerat ELISA. I analysen fångas ämnet skall mätas i microplate väl, oftast av en specifik antikropp. Ett enzym som kallas pepparrotsperoxidas är kopplat till antikroppen och denna katalyserar omvandlingen av en ofärgad förening o-fenylendiamin dihydroklorid (OPD) till en gul en: 2,3 diaminophenazine. Reaktionen visas i bilden ovan.
Intensiteten i färgen är direkt relaterad till koncentrationen av ämnet som analyseras och analysen kan anpassas till olika ämnen med hjälp av olika antikroppar.
Vi satte upp en serie koncentrationer av 2,3 diaminophenazine att testa maskinen och kollade dem på en kommersiell spektrofotometer. Maskinen vi använde var relativt billigt - ca £10.000. Graferna från kommersiella maskinen och vår spektrofotometer visas ovan.
Jag måste säga, det fungerade bättre än vi trodde det skulle. Data är verkligen ganska bra, även om kommersiella maskinen kan läsa högre absorbanserna med noggrannhet - linearitet gick sönder på om A = 1.0 för vår maskin. På en absorbans 1, endast 10% av ljuset gör det till detektorn och så känsligheten hos detektorn blir viktigt. Du kommer att märka att de två raderna gradient är olika, även om detta kan justeras av tweaking beräkningen i koden. Viktigast, lyckats maskinen slutföra en fullständig krets av de 96 proverna i perfekt anpassning och sedan tillbaka till startpunkten sig igen.