Med hjälp av Fluorometer att kvantifiera dsDNA (10 / 11 steg)
Steg 10: Fluorometer avläsningar av prover och dataanalys
1. om R ^ 2 värde är acceptabelt, läsa de 50 prov (inklusive deras dubbletter) på fluorometer och bokföra värdet i lab notebook
Exempel: Mikroorganismer arter: {78301
{80231.
Duplicera läsning på botten
Den dubbla behandlingen bör ett liknande värde till den första behandlingen. Om inte, finns det tillräckligt många prov i båda rören för att läsa om den. Om ett av rören har en fluorometer läsa nära den 11 standarder tube värde, som förmodligen betyder ingen DNA lades till. Ta bort fluorometer värdet om så är fallet och kör provet.
2. innan fluorometer värden i excel-bladet, se över spänna av fluorometer värden för 1:20 utspädda prover.
Se till att ingen av avläsningarna som provet är högre än det högsta standard värdet. Om det händer måste du köra igen som
prov på en högre utspädning.
3 . Ange i de enskilda värden som du läst in i första och andra blå celler som anges i figur 3. Siffran i den lila cellen anger koncentrationen av dsDNA i ng/ul, men detta kanske vara felaktig.
4. kontrollera att koncentrationen är korrekt, dubbelklicka på cellen lila och beräkningar bör visas som figur 4
-De skall använda celler A-J, cell K inte ingår i både figuren och den lila beräkning cellen.
-Den röda pilen pekar mot 10 i figur 2 visar hur mycket av DNA som var portionerats
* Om 5ul av DNA var portionerats denna 10 måste ändras till 5 (också antar att 95ul av 1 X TE buffert lades till)
Kom ihåg att dessa prover hade en 1:20 utspädning så titta på 1:20 utspädning cell i excel-bladet. Det är den lila cellen multiplicerat med
20. det är värdet som ska registreras.
5. när dessa beräkningar är korrekta, registrera DNA koncentrationen, som dök upp i cellen lila, i lab notebook
6 . Spela in DNA koncentrationerna på varje DNA röret med en tunn sharpie markör (figur 3)