Med hjälp av Fluorometer att kvantifiera dsDNA (6 / 11 steg)
Steg 6: Konfigurera Assay
Förbereda standarderna av alikvotering den lägsta koncentrationen som DNA först; för att förhindra föroreningar. Börja med standard 11 och stäng sedan locket.
1 25ul 2.0ng /ul standard + 75ul 1 X TE
2 20ul 2.0ng / ul standard + 80ul 1 X TE
3 15ul 2.0ng / ul standard + 85ul 1 X TE
4 10ul 2.0ng / ul standard + 90ul 1 X TE
5 5ul 2.0ng / ul standard + 95ul 1 X TE
6 3ul 2.0ng / ul standard + 97ul 1 X TE
7 1ul 2.0ng / ul standard + 99ul 1 X TE
8 0.5ul 2.0ng / ul standard + 99.5ul 1 X TE
9 1ul 0,2 ng/ul standard + 99ul 1 X TE
10 0.5ul 0.2ng / ul standard + 99.5ul 1 X TE
11 100ul 1 X TE
Provet ställer in
Den högsta koncentrationen av flurometer kan läsa är 0.2ug. DNA är känt att vara högre än 0.2ug och utföra de nödvändiga utspädningarna för att få en DNA-koncentrationen är mindre än 0.2ug. Alltid utföra minst en 1:20 utspädning av DNA-prover . Om du arbetar med starkt koncentrerad DNA (500ng/ul), ska en 1: 200 utspädning vara bra.
1. Lägg till 95ul 1 X TE buffert till alla prov rören (inklusive det är duplikat/tre exemplar röret).
2. Lägg till 5ul av det utspädda DNA provet till 95ul 1 X TE-rör. Fördela pipett röret efter varje alikvot av DNA (figur 1). Det bör finnas en total volym på 100ul på denna punkt.
3. Stäng av molekylär hood ljuset
4. ta tag i picogreen
6. 1000ul reagens pipetten Lägg till 8520ul av 1 x TE buffert i varje Picogreen rör
7. kort vortex alla Picogreen rör att blanda
8. om möjligt, Centrifugera rören picogreen
9. uttagna 100ul av Picogreen (med en ny pipettspetsen för varje alikvot) till alla 161 rör (figur 2) börjar med den lägsta standarden (100ul 1 X TE). Cap rören efter varje picogreen uttagna.
a. Picogreen röret bör innehålla tillräckligt Picogreen för 42 prover. Töm tuben.
10. ta en annan Picogreen röret och upprepar steg 9 tills alla DNA prover inklusive standarderna som har fått 100ul av picogreen