Med hjälp av Fluorometer att kvantifiera dsDNA (9 / 11 steg)
Steg 9: Fluorometer Microsoft Excel-blad
2. på Excel-blad, infoga fluorometer värde för standard utspädning 1 (tub 1) under "0" / cellen kolumn (figur 1). Detta bör vara det lägsta värdet som fluorometer.
3. ange de återstående 11 standard fluorometer värdena i kolumnen rätt som anges i figur 1. Det bör vara en minskning i flurometer värden när du rör ner raden. Om en av isolaten inte följer detta mönster, det skulle vara bäst att ta bort denna punkt från de andra 10 standarderna.
4. när alla 11 normer anges, linjära regressionsekvationen och R ^ 2 visas (figur 2)
a. att dubbelkolla som punkterna på linjen motsvarar data i cellerna, klickar du på en av punkterna på grafen. Ett urval
rutnätet syns på några av cellerna. Cellerna A8-J8 (inte inkludera K8 ) bör väljas.
b. alla r ^ 2 värde under 0,99 är oacceptabelt och måste vara omgjord (gå tillbaka till Att skapa DNA utspädning standarder )
c. in r ^ 2 värde och ekvationen för linjen i fluorometer anteckningsboken
En viktig sak att titta på är om punkterna ser övermättade (figur 3). Den sista punkten börjar visa en liten krökning som anger oversaturation. Detta kan inträffa på grund av dramatiska ökningar i DNA standard från en standard till nästa (från 20ul sedan till 50ul). Detta blir oftast inte ett problem så länge som det finns mer gradvisa ökningar av DNA stnadards (20ul; 40ul; då 50ul).
Även med dessa försiktighetsåtgärder, över mättnad kan fortfarande uppstå. Vanligen åtgärda mättnad genom att ta bort den punkt som orsakar kurvan kommer att fixa det (figur 4). I detta fall var det den högsta punkten.